基因编纂年夜牛Nature子刊发文：CRISPR单碱基编纂正确！

来自韩国根蒂根基科学研究所IBS的研究职员揭晓了题为“Genome-wide target specificities of CRISPR RNA-guided progra妹妹able deaminases”的文章，证明了近来研发的基因编纂要领的正确性。

作者： 年夜康健派编纂来历： 本站原创2017-04-14 16:12:38

来自韩国根蒂根基科学研究所IBS的研究职员揭晓了题为 Genome-wide target specificities of CRISPR RNA-guided progra妹妹able deaminases 的文章，证明了近来研发的基因编纂要领的正确性。这一研究结果宣布于4月10日的Nature Biotechnology杂志上。

文章的通信作者是基因编纂范畴的年夜牛KIM Jin-Soo，其研究组曾经于Nature等顶级杂志揭晓多篇文章，提出了CRISPR技能范畴的不少立异设法，好比他们曾经设计出了今朝最小的CRISPR-Cas9，并经由过程腺陪同病毒（AAV）将其递送到了肌细胞以及小鼠的眼睛里，用以编纂致使掉明的基因。

对于在最新这项研究，Kim暗示， 这是第一次于整个基因组程度上验证了这类碱基编纂的正确性 。

基因编纂东西的倏地成长令整个生物学研究范畴疯狂，今朝第三代DNA铰剪的主角是CRISPR，这是一种比其前身更快更自制的东西。CRISPR-Cas9以及CRISPR-Cpf1经由过程切除了小的DNA序列，讷讷感缄默沉静或者降低过错基因的表达。然而，去年一种新的碱基编纂要领：不会惹起随机的DNA缺掉以及插入，而是替代一个DNA基因，吸引了生物学家的留意。

这类基因校订要领很要害，由于一些疾病就是由于DNA的四种基本组分之一（腺嘌呤（A）、胞嘧啶（C）、鸟嘌呤（G）以及胸腺嘧啶（T））堕落惹起的。DNA中的单核苷酸过错被称为点突变，由点突变惹起的疾病包孕：囊性纤维化，镰状细胞性血虚以及色盲。

与现有的第三代DNA铰剪差别，单碱基编纂要领是由与CRISPR-Cas9（nCas9，暗语酶）变体与别的一种称为胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase）组成，用T取代C，经由过程导向RNA间接指向准确DNA位置。不外到今朝为止，还不知道这类碱基编纂器是仅于过错基因区域中阐扬作用，照旧能于其它区域举行替代（中靶）。

上个月，IBS的研究职员别离转变了肌养分不良卵白基因（Dmd），和酪氨酸酶基因（Tyr）中的单个核苷酸，用以查验CRISPR-nCas9胞苷脱氨酶的交融。研究得到了两方面的乐成：携带Dmd基因单个核苷酸突变的小鼠胚胎，致使小鼠肌肉中没法孕育发生dystrophin卵白；别的一种是携带Tyr突变的小鼠，显示的病症是白化病性状。Dystrophin卵白与肌肉肌养分不良症疾病相干，酪氨酸酶节制黑素的天生。

而于最新这项研究中，他们又于基因组规模能验证了这一要领的正确性，并于肌养分不良卵白以及酪氨酸酶基因中修改了单个核苷酸。

为了确定整个基因组的基因编纂准确性，研究职员修改了一种过错检测技能：Digenome-seq，这一技能可于全基因组规模内检测人类细胞中的CRISPR/Cas9中靶效应（新要领闭幕CRISPR-CAS9争辩）。同时也革新了计较机步伐（Digenome 2.0），更周全地辨认中靶，比力了差别的导向RNA，从而找到了削减妨碍并增长特同性的RNA.

哄骗这类技能，研究职员验证了碱基编纂器技能的准确性，而且发明它比当前第三代CRISPR-Cas9更正确。碱基编纂技能能引诱人类基因组中1-67个位点发生C-to-T转换，而CRISPR-Cas9于30-241个位点能举行切割，这象征着碱基编纂器正于削减中靶变迁。 是以，估计这些碱基编纂器将会成为广泛使用的受接待CRISPR技能， Kim说。

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